நாவல் கொரோனா வைரஸ் (SARS-CoV-2) மல்டிபிளக்ஸ் நிகழ்நேர PCR கிட்
இந்த அதிக உணர்திறன், பயன்படுத்த தயாராக இருக்கும் PCR கிட் நீண்ட கால சேமிப்பிற்காக lyophilized வடிவத்தில் (உறைதல்-உலர்த்துதல் செயல்முறை) கிடைக்கிறது.கிட் அறை வெப்பநிலையில் கொண்டு செல்லப்பட்டு சேமிக்கப்படும் மற்றும் ஒரு வருடத்திற்கு நிலையானது.ப்ரீமிக்ஸின் ஒவ்வொரு குழாயிலும் பிசிஆர் பெருக்கத்திற்குத் தேவையான அனைத்து எதிர்வினைகளும் உள்ளன, இதில் ரிவர்ஸ்-டிரான்ஸ்கிரிப்டேஸ், டாக் பாலிமரேஸ், ப்ரைமர்கள், ஆய்வுகள் மற்றும் டிஎன்டிபிகள் அடி மூலக்கூறுகள் அடங்கும்.இதற்கு 13ul காய்ச்சி வடிகட்டிய நீர் மற்றும் 5ul பிரித்தெடுக்கப்பட்ட RNA டெம்ப்ளேட்டை மட்டுமே சேர்க்க வேண்டும், பின்னர் அதை PCR கருவிகளில் இயக்கலாம் மற்றும் பெருக்கலாம்.
qPCR இயந்திரம் பின்வரும் தேவைகளைப் பூர்த்தி செய்ய வேண்டும்:
1. பொருத்து 8 துண்டு PCR குழாய் அளவு 0.2 மில்லி
2. நான்குக்கும் மேற்பட்ட கண்டறிதல் சேனல்கள்:
சேனல் | உற்சாகம் (nm) | உமிழ்வு (என்எம்) | முன் அளவீடு செய்யப்பட்ட சாயங்கள் |
1. | 470 | 525 | FAM, SYBR கிரீன் ஐ |
2 | 523 | 564 | VIC, ஹெக்ஸ், TET, JOE |
3. | 571 | 621 | ராக்ஸ், டெக்சாஸ்-ரெட் |
4 | 630 | 670 | CY5 |
PCR-தளங்கள்:
7500 ரியல்-டைம் PCR சிஸ்டம், பயோராட் CF96, iCycler iQ™ நிகழ்நேர PCR கண்டறிதல் அமைப்பு, ஸ்ட்ராடஜீன் Mx3000P, Mx3005P
நாவல் கொரோனா வைரஸ் நியூக்ளிக் அமிலம் கண்டறிதல் மறுஉருவாக்கத்தின் குளிர் சங்கிலி போக்குவரத்து சிரமம்
வழக்கமான நியூக்ளிக் அமிலம் கண்டறிதல் எதிர்வினைகள் நீண்ட தூரத்திற்கு கொண்டு செல்லப்படும் போது, (-20±5) ℃ குளிர் சங்கிலி சேமிப்பு மற்றும் போக்குவரத்து வினைகளில் உள்ள நொதியின் உயிரியக்கம் செயலில் இருப்பதை உறுதி செய்ய வேண்டும்.வெப்பநிலை தரநிலையை அடைவதை உறுதி செய்ய, 50g க்கும் குறைவான நியூக்ளிக் அமில சோதனை மறுஉருவாக்கத்தின் ஒவ்வொரு பெட்டிக்கும் பல கிலோகிராம் உலர் பனி தேவைப்படுகிறது, ஆனால் அது இரண்டு அல்லது மூன்று நாட்களுக்கு மட்டுமே நீடிக்கும்.தொழில் நடைமுறையின் கண்ணோட்டத்தில், உற்பத்தியாளர்களால் வழங்கப்பட்ட உலைகளின் உண்மையான எடை கொள்கலனின் 10% (அல்லது இந்த மதிப்பை விட மிகக் குறைவாக) குறைவாக உள்ளது.பெரும்பாலான எடை உலர்ந்த பனி, ஐஸ் கட்டிகள் மற்றும் நுரை பெட்டிகள் ஆகியவற்றிலிருந்து வருகிறது, எனவே போக்குவரத்து செலவு மிகவும் அதிகமாக உள்ளது.
மார்ச் 2020 இல், COVID-19 வெளிநாட்டில் பெரிய அளவில் வெடிக்கத் தொடங்கியது, மேலும் நாவல் கொரோனா வைரஸ் நியூக்ளிக் அமிலம் கண்டறிதல் மறுஉருவாக்கத்திற்கான தேவை வியத்தகு அளவில் அதிகரித்தது.குளிர் சங்கிலியில் உள்ள உலைகளை ஏற்றுமதி செய்வதற்கான அதிக செலவு இருந்தபோதிலும், பெரிய அளவு மற்றும் அதிக லாபம் காரணமாக பெரும்பாலான உற்பத்தியாளர்கள் அதை ஏற்றுக்கொள்ள முடியும்.
எவ்வாறாயினும், தொற்றுநோய்க்கு எதிரான தயாரிப்புகளுக்கான தேசிய ஏற்றுமதி கொள்கைகளின் முன்னேற்றம், அத்துடன் மக்கள் மற்றும் தளவாடங்களின் ஓட்டத்தின் மீதான தேசிய கட்டுப்பாட்டை மேம்படுத்துதல் ஆகியவற்றுடன், உலைகளின் போக்குவரத்து நேரத்தில் நீட்டிப்பு மற்றும் நிச்சயமற்ற தன்மை உள்ளது, இது முக்கிய தயாரிப்பு சிக்கல்களை ஏற்படுத்தியது. போக்குவரத்து மூலம்.நீட்டிக்கப்பட்ட போக்குவரத்து நேரம் (சுமார் அரை மாத போக்குவரத்து நேரம் மிகவும் பொதுவானது) தயாரிப்பு வாடிக்கையாளரை அடையும் போது அடிக்கடி தயாரிப்பு தோல்விகளுக்கு வழிவகுக்கிறது.இது பெரும்பாலான நியூக்ளிக் அமில எதிர்வினைகளை ஏற்றுமதி செய்யும் நிறுவனங்களை தொந்தரவு செய்துள்ளது.
PCR மறுஉருவாக்கத்திற்கான லியோபிலைஸ் செய்யப்பட்ட தொழில்நுட்பம் உலகளவில் நாவல் கொரோனா வைரஸ் நியூக்ளிக் அமிலம் கண்டறிதல் மறுஉருவாக்கத்தை கொண்டு செல்ல உதவியது
லியோஃபிலைஸ் செய்யப்பட்ட பிசிஆர் ரியாஜெண்டுகளை அறை வெப்பநிலையில் கொண்டு செல்லலாம் மற்றும் சேமிக்கலாம், இது போக்குவரத்து செலவைக் குறைப்பது மட்டுமல்லாமல், போக்குவரத்து செயல்முறையால் ஏற்படும் தர சிக்கல்களைத் தவிர்க்கலாம்.எனவே, ஏற்றுமதிப் போக்குவரத்தின் சிக்கலைத் தீர்க்க ரியாஜெண்டை லியோபிலைஸ் செய்வதே சிறந்த வழியாகும்.
லியோபிலைசேஷன் என்பது ஒரு தீர்வை ஒரு திட நிலையில் உறைய வைப்பதை உள்ளடக்குகிறது, பின்னர் வெற்றிட நிலையில் நீராவியை பதங்கமாக்கி பிரித்தெடுக்கிறது.உலர்ந்த கரைப்பானது அதே கலவை மற்றும் செயல்பாட்டுடன் கொள்கலனில் உள்ளது.வழக்கமான திரவ எதிர்வினைகளுடன் ஒப்பிடும்போது, லிமிங் பயோவால் தயாரிக்கப்பட்ட முழு-கூறு லியோபிலைஸ் செய்யப்பட்ட நாவல் கொரோனா வைரஸ் நியூக்ளிக் அமிலம் கண்டறிதல் மறுஉருவாக்கமானது பின்வரும் பண்புகளைக் கொண்டுள்ளது:
மிகவும் வலுவான வெப்ப நிலைத்தன்மை:இது 60 நாட்களுக்கு 56℃ இல் நிற்கும் சிகிச்சையுடன் முடியும், மேலும் மறுபொருளின் உருவவியல் மற்றும் செயல்திறன் மாறாமல் இருக்கும்.
சாதாரண வெப்பநிலை சேமிப்பு மற்றும் போக்குவரத்து:குளிர் சங்கிலி தேவையில்லை, சீல் அவிழ்ப்பதற்கு முன் குறைந்த வெப்பநிலையில் சேமிக்க தேவையில்லை, குளிர் சேமிப்பு இடத்தை முழுமையாக விடுவிக்கவும்.
பயன்படுத்தத் தயார்:அனைத்து கூறுகளையும் lyophilizing, கணினி கட்டமைப்பு தேவை இல்லை, என்சைம் போன்ற அதிக பாகுத்தன்மை கொண்ட கூறுகள் இழப்பு தவிர்க்கும்.
ஒரு குழாயில் பலவகை இலக்குகள்:கண்டறிதல் இலக்கு வைரஸ் மரபணு மாற்றத்தைத் தவிர்ப்பதற்காக நாவல் கொரோனா வைரஸ் ORF1ab மரபணு, N மரபணு, S மரபணு ஆகியவற்றை உள்ளடக்கியது.தவறான எதிர்மறையைக் குறைப்பதற்காக, மனித RNase P மரபணு உள் கட்டுப்பாட்டாகப் பயன்படுத்தப்படுகிறது, இதனால் மாதிரி தரக் கட்டுப்பாட்டிற்கான மருத்துவத் தேவையைப் பூர்த்தி செய்கிறது.