நாவல் கொரோனா வைரஸ் (SARS-CoV-2) மல்டிப்ளெக்ஸ் ரியல்-டைம் பி.சி.ஆர் கிட்
இந்த மிக முக்கியமான, பயன்படுத்த தயாராக உள்ள பி.சி.ஆர் கிட் நீண்ட கால சேமிப்பிற்காக லியோபிலிஸ் செய்யப்பட்ட வடிவத்தில் (முடக்கம்-உலர்த்தும் செயல்முறை) கிடைக்கிறது. கிட் கொண்டு செல்லப்பட்டு அறை வெப்பநிலையில் சேமித்து வைக்கப்பட்டு ஒரு வருடம் நிலையானது. பிரிமிக்ஸ் ஒவ்வொரு குழாயிலும் பி.சி.ஆர் பெருக்கத்திற்குத் தேவையான அனைத்து எதிர்வினைகளும் உள்ளன, இதில் தலைகீழ்-டிரான்ஸ்கிரிப்டேஸ், தாக் பாலிமரேஸ், ப்ரைமர்கள், ஆய்வுகள் மற்றும் டி.என்.டி.பி.எஸ் அடி மூலக்கூறுகள் உள்ளன. இதற்கு 13ul வடிகட்டிய நீர் மற்றும் 5ul பிரித்தெடுக்கப்பட்ட ஆர்.என்.ஏ வார்ப்புருவை மட்டுமே சேர்க்க வேண்டும், பின்னர் அதை பி.சி.ஆர் கருவிகளில் இயக்கலாம் மற்றும் பெருக்கலாம்.
QPCR இயந்திரம் பின்வரும் தேவைகளைப் பூர்த்தி செய்ய வேண்டும்:
1. 8 துண்டு பி.சி.ஆர் குழாய் அளவு 0.2 மில்லி பொருத்து
2. நான்கு கண்டறிதல் சேனல்களைக் கொண்டிருங்கள்:
சேனல் |
உற்சாகம் (என்.எம்) |
உமிழ்வு (என்.எம்) |
முன் அளவீடு செய்யப்பட்ட சாயங்கள் |
1. |
470 |
525 |
FAM, SYBR Green I. |
2 |
523 |
564 |
VIC, HEX, TET, JOE |
3. |
571 |
621 |
ROX, TEXAS-RED |
4 |
630 |
670 |
CY5 |
பி.சி.ஆர்-தளங்கள்:
7500 ரியால்-டைம் பி.சி.ஆர் சிஸ்டம், பயோராட் சி.எஃப் 96, ஐசைக்லர் ஐ.க்யூ ™ ரியல்-டைம் பி.சி.ஆர் கண்டறிதல் அமைப்பு, ஸ்ட்ராடஜீன் எம்.எக்ஸ் 3000 பி, எம்.எக்ஸ் 30000 பி
நாவல் கொரோனா வைரஸ் நியூக்ளிக் அமிலம் கண்டறிதல் மறுஉருவாக்கத்தின் குளிர் சங்கிலி போக்குவரத்தின் சிரமம்
வழக்கமான நியூக்ளிக் அமிலக் கண்டறிதல் உலைகள் நீண்ட தூரத்திற்கு கொண்டு செல்லப்படும்போது, (-20 ± 5) ℃ குளிர் சங்கிலி சேமிப்பு மற்றும் போக்குவரத்து ஆகியவை எதிர்வினைகளில் உள்ள நொதியின் பயோஆக்டிவ் செயலில் இருப்பதை உறுதி செய்ய வேண்டும். வெப்பநிலை தரத்தை எட்டுகிறது என்பதை உறுதிப்படுத்த, நியூக்ளிக் அமில சோதனை மறுபிரதியின் ஒவ்வொரு பெட்டியிலும் 50 கிராம் கூட குறைவாக பல கிலோகிராம் உலர்ந்த பனி தேவைப்படுகிறது, ஆனால் இது இரண்டு அல்லது மூன்று நாட்களுக்கு மட்டுமே நீடிக்கும். தொழிற்துறை நடைமுறையின் பார்வையில், உற்பத்தியாளர்களால் வழங்கப்படும் உலைகளின் உண்மையான எடை கொள்கலனின் 10% க்கும் குறைவாக (அல்லது இந்த மதிப்பை விட மிகக் குறைவு). எடையின் பெரும்பகுதி உலர்ந்த பனி, ஐஸ் கட்டிகள் மற்றும் நுரை பெட்டிகளிலிருந்து வருகிறது, எனவே போக்குவரத்து செலவு மிக அதிகம்.
மார்ச் 2020 இல், COVID-19 வெளிநாட்டில் பெரிய அளவில் வெடிக்கத் தொடங்கியது, மேலும் நாவல் கொரோனா வைரஸ் நியூக்ளிக் அமிலம் கண்டறிதல் மறுஉருவாக்கத்திற்கான தேவை வியத்தகு அளவில் அதிகரித்தது. குளிர் சங்கிலியில் உலைகளை ஏற்றுமதி செய்வதற்கான அதிக செலவு இருந்தபோதிலும், பெரும்பாலான உற்பத்தியாளர்கள் பெரிய அளவு மற்றும் அதிக லாபம் காரணமாக அதை ஏற்க முடியும்.
இருப்பினும், தொற்றுநோய்க்கு எதிரான தயாரிப்புகளுக்கான தேசிய ஏற்றுமதிக் கொள்கைகளை மேம்படுத்துவதோடு, மக்கள் மற்றும் தளவாடங்களின் ஓட்டத்தின் மீதான தேசிய கட்டுப்பாட்டை மேம்படுத்துவதோடு, உலைகளின் போக்குவரத்து நேரத்தில் நீட்டிப்பு மற்றும் நிச்சயமற்ற தன்மை உள்ளது, இதன் விளைவாக முக்கிய தயாரிப்பு சிக்கல்கள் ஏற்பட்டன போக்குவரத்து மூலம். நீட்டிக்கப்பட்ட போக்குவரத்து நேரம் (சுமார் அரை மாத போக்குவரத்து நேரம் மிகவும் பொதுவானது) தயாரிப்பு வாடிக்கையாளரை அடையும் போது அடிக்கடி தயாரிப்பு தோல்விகளுக்கு வழிவகுக்கிறது. இது பெரும்பாலான நியூக்ளிக் அமில எதிர்வினைகள் ஏற்றுமதி நிறுவனங்களை சிக்கலில் ஆழ்த்தியுள்ளது.
பி.சி.ஆர் மறுஉருவாக்கத்திற்கான லியோபிலிஸ் தொழில்நுட்பம் நாவல் கொரோனா வைரஸ் நியூக்ளிக் அமிலம் கண்டறிதல் மறுஉருவாக்கத்தை உலகளவில் கொண்டு செல்ல உதவியது
லியோபிலிஸ் செய்யப்பட்ட பி.சி.ஆர் உலைகளை அறை வெப்பநிலையில் கொண்டு சென்று சேமிக்க முடியும், இது போக்குவரத்து செலவைக் குறைப்பது மட்டுமல்லாமல், போக்குவரத்து செயல்முறையால் ஏற்படும் தரமான சிக்கல்களையும் தவிர்க்கலாம். ஆகையால், ஏற்றுமதி போக்குவரத்தின் சிக்கலைத் தீர்க்க சிறந்த வழியாக மறுஉருவாக்கத்தை லைஃபைலைஸ் செய்வது.
லியோபிலிசேஷன் என்பது ஒரு தீர்வை ஒரு திட நிலைக்கு உறைய வைப்பதை உள்ளடக்கியது, பின்னர் வெற்றிட நிலையில் நீராவியை பதங்கப்படுத்தி பிரிக்கிறது. உலர்ந்த கரைப்பான் ஒரே கலவை மற்றும் செயல்பாட்டுடன் கொள்கலனில் உள்ளது. வழக்கமான திரவ உலைகளுடன் ஒப்பிடுகையில், லிமிங் பயோ தயாரித்த முழு-கூறு லியோபிலிஸ் நாவல் கொரோனா வைரஸ் நியூக்ளிக் அமிலக் கண்டறிதல் மறுஉருவாக்கம் பின்வரும் பண்புகளைக் கொண்டுள்ளது:
மிகவும் வலுவான வெப்ப நிலைத்தன்மை: இது 60 நாட்களுக்கு 56 at இல் நிலைநிறுத்த சிகிச்சையுடன் முடியும், மேலும் மறுபிரதியின் உருவவியல் மற்றும் செயல்திறன் மாறாமல் இருக்கும்.
சாதாரண வெப்பநிலை சேமிப்பு மற்றும் போக்குவரத்து: குளிர் சங்கிலி தேவையில்லை, சீல் செய்வதற்கு முன் குறைந்த வெப்பநிலையில் சேமிக்க தேவையில்லை, குளிர் சேமிப்பு இடத்தை முழுமையாக விடுவிக்கவும்.
பயன்படுத்தத் தயார்: அனைத்து கூறுகளின் லைஃபைலைசிங், கணினி உள்ளமைவு தேவையில்லை, நொதி போன்ற அதிக பாகுத்தன்மை கொண்ட கூறுகளின் இழப்பை தவிர்க்கிறது.
ஒரு குழாயில் மல்டிபிளக்ஸ் இலக்குகள்: கண்டறிதல் இலக்கு வைரஸ் மரபணு மாற்றத்தைத் தவிர்ப்பதற்காக நாவல் கொரோனா வைரஸ் ORF1ab மரபணு, N மரபணு, S மரபணு ஆகியவற்றை உள்ளடக்கியது. தவறான எதிர்மறையைக் குறைப்பதற்காக, மாதிரி தரக் கட்டுப்பாட்டுக்கான மருத்துவத் தேவையைப் பூர்த்தி செய்வதற்காக, மனித RNase P மரபணு உள் கட்டுப்பாட்டாகப் பயன்படுத்தப்படுகிறது.